A citometria de fluxo é uma técnica de diagnóstico e pesquisa conhecida há muitos anos e amplamente utilizada em oncologia. A citometria de fluxo permite que as células que formam a suspensão em um fluxo laminar, ou estratificado, de líquido, sejam examinadas com um dispositivo denominado citômetro de fluxo. Quais são as indicações para citometria de fluxo e como ela é feita?
A citometria de fluxo é utilizada no diagnóstico de neoplasias hematológicas por se tratar de tumores líquidos, mas é apenas um método auxiliar. No entanto, vale lembrar que existe um câncer que só pode ser diagnosticado com esse método. Esta é a leucemia linfocítica crônica.
Em outras doenças neoplásicas, a citometria de fluxo é usada como um auxílio diagnóstico, pois mostra características muito importantes das células neoplásicas. Este método também é usado para avaliar a eficácia do tratamento aplicado.
Citometria de fluxo - o que mostra?
O fluxo de líquido contendo as partículas de teste é passado a uma velocidade constante (100-2000 partículas por segundo) através da área de medição do citômetro. Aqui, os métodos ópticos analisam formas, dimensões, estrutura interna das células e seu conteúdo, por exemplo, DNA. Todas as células são marcadas opticamente.
As medições são baseadas nas propriedades de espalhamento da luz laser por células individuais ou seus componentes (núcleos, cromossomos, mitocôndrias) ou na fluorescência induzida por eles.
Os sinais ópticos são convertidos em sinais elétricos, os quais, após análise, são apresentados graficamente como distribuições mono ou biparamétricas.
O citômetro também permite a segregação de partículas após sair da zona de medição. Pode-se dizer que o aparelho organiza (separa) células com os mesmos elementos constituintes (classificação preparativa) ou extrai tipos específicos de células (classificação analítica).
A citometria de fluxo permite o estudo das características da população de células, análise de componentes celulares (especialmente como ácidos nucléicos, proteínas, antígenos de superfície e celulares), atividade enzimática, potencial de membrana, atividade mitocondrial, pH intracelular, transporte de íons e fluidez da membrana.
Citometria de fluxo - aplicação
A citometria de fluxo utilizada no diagnóstico permite determinar o fenótipo das células neoplásicas e a expressão de proteínas individuais. Para conseguir isso, são usados anticorpos fluorescentes marcados que se ligam de maneira característica aos antígenos na superfície da membrana celular. Graças a isso, é possível determinar o grau de sua diferenciação, origem, marcadores prognósticos e terapêuticos, que facilitam a decisão sobre novos procedimentos diagnósticos e terapêuticos.
Outra aplicação da citometria de fluxo é monitorar a eficácia do tratamento aplicado por meio da avaliação dos chamados "doença residual", que é a porcentagem de células com fenótipos semelhantes a tumor que permanecem após o tratamento.
A citometria de fluxo também facilita a pesquisa de doenças cancerígenas. Graças a esse método, é possível pesquisar, por exemplo, receptores que estão na superfície das células neoplásicas e podem se tornar alvos de tratamento.
O método permite avaliar a atividade de proteínas dentro da célula. Também é possível avaliar o ciclo celular, por exemplo, determinando a quantidade de DNA na célula.
No processo de proliferação, uma célula passa pelo ciclo celular por fases em que duplica a quantidade de DNA. Ao avaliar essa quantidade, é possível indicar em que fase as células se encontram, se estão se proliferando ou não, ou se entram em apoptose. Em outras palavras, com o auxílio da citometria de fluxo é possível descobrir se as células estão se preparando para a apoptose, o processo de morte programada.
Citometria de fluxo - o futuro
A citometria de fluxo é conhecida e usada na medicina há várias décadas. No entanto, está em constante aperfeiçoamento e cria novas possibilidades de diagnóstico e pesquisa. No primeiro período de uso desse método, só foi possível determinar o tamanho e o grau de granularidade das células.
O uso de luz laser em dispositivos de citometria de fluxo permite excitar certos marcadores fluorescentes e então avaliar sua emissão. Os citômetros modernos permitem um aumento significativo no número de marcadores avaliados ao mesmo tempo, o que definitivamente se traduz em um aumento na sensibilidade desse método.
Por isso, é utilizado não apenas no diagnóstico de doenças neoplásicas, mas também para avaliar a eficácia do tratamento.
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